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ELISA試劑盒質量平衡及試驗規范
更新時間:2016-10-31   點擊次數:1678次

ELISA試劑盒中通常有3次加樣步聚,即加標本,加酶聯絡物,加底物。加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并留心不可濺起,不可發生氣泡。
加標本通常用微量加樣器,按規矩的量參與板孔中。每次加標本應更換吸嘴,避免發生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。
有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規矩的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參與稀釋液,再在其間參與血清標本,然后在微型轟動器上轟動1分鐘以確?;旌?。加酶聯絡物使用液和底物使用液時可用定量多道加液器,使加液進程靈敏結束。在ELISA試劑盒中通常有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶聯絡物后??乖贵w反應的結束需要有一定的溫度和時間,這一保溫進程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA查看試劑盒中似不恰當。
ELISA試劑盒屬固相免疫測定,抗原、抗體的聯絡只在固相表面上發生。以抗體包被的夾心法為例,參與板孔中的標本,其間的抗原并不是都有對等的和固相抗聯絡的機遇,只需zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐,因此需經分散
才能到達反應的結束。在這以后參與的酶符號抗體與固相抗原的聯絡也相同如此。這便是為何ELISA查看試劑盒反應老是需要一定時間的溫育。
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體聯絡的適合溫度。在樹立ELISA方法作反應動力學研究時,試驗標明,兩次抗原抗體反應通常在37℃經1-2小時,產物的生成可達。為加速反應,可提高反應的溫度,有些試驗在43℃進行,但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反應4℃更為*,在放射免疫測定中多使反應在冰箱中,以形成zui多的堆積。但因所需時間太長,在ELISA試劑盒中通常不予選用。
ELISA試劑盒的質量凹凸要素取決于這兩個方面
  1.選材目標。
  2.選材進程。
胎牛血清用于選材的胎牛應健康無病并且在的出生天數以內,選材進程應嚴峻按照操作規程實行,制備出的血清要經過嚴峻的質量判定。分外懇求有:
  a.要經過濾膜過濾除菌,確保無菌;
  b.證明所用血清中不含對所出產疫苗病毒的按捺物;
  c.無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家懇求無細菌噬菌體污染;
  d.對細胞有出色的支持繁衍作用;
  e.有必要來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應具有恰當的監測系統。
 

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